Trùng Thảo (CS) là một loại nấm côn trùng nổi tiếng, phân bố tự nhiên ở cao nguyên Tây Tạng thuộc Châu Á và Hy Mã Lạp Sơn. Gần đây từ đồng nghĩa này được chuyển sang đông trùng hạ thảo bởi cả cộng đồng khoa học và phi khoa học. Nó được sử dụng rộng rãi như một loại thuốc bổ và thực phẩm chữa bệnh trong y học cổ truyền Trung Quốc (TCM), vì nó có những lợi ích sức khỏe tuyệt vời. Để hỗ trợ các thuộc tính chức năng của nó, nhiều cuộc điều tra đã được thực hiện để tìm ra vai trò thích nghi, kích thích tình dục, chống oxy hóa, chống lão hóa, bảo vệ thần kinh, nootropic, điều hòa miễn dịch, chống ung thư và bảo vệ gan. Phần quả cũng như ấu trùng của nó sở hữu các phần hoạt tính sinh học mạnh và thành phần của chúng gần như giống nhau ở cả hai. Các nguyên tắc hoạt tính sinh học là nucleoside, exo-polysacarit, sterol và protein, trong số những loại khác. Trong số các nucleoside, adenosine và cordycepin là những chất đánh dấu sinh hóa chính. Hơn nữa, các loại chiết xuất dung môi khác nhau và hỗn hợp của chúng thể hiện nhiều hoạt động dược lý, trong khi các chiết xuất nước và metanol với nguồn nucleoside và polysacarit phong phú nhất cũng cho thấy nhiều hoạt động dược lý. Đánh giá này đưa ra một cái nhìn toàn cảnh về lợi ích sức khỏe tiềm năng của các loại phân số hoạt tính sinh học khác nhau cùng với nhu cầu quản lý bền vững CS đối với sức khỏe con người.
Trùng Thảo (CS) một loại nấm thuộc họ “Clavicipitaceae”, là một loại nấm dược liệu quý hiếm nổi tiếng ở Trung Quốc và đã được sử dụng trong y học cổ truyền Trung Quốc (TCM) trong nhiều thế kỷ. Nó được phân bố rộng rãi ở Trung Quốc, Cao nguyên Tây Tạng, Bhutan, Nepal và các vùng đông bắc của Ấn Độ ở độ cao 3500–5000 mét so với mực nước biển. Trong tiếng Trung, nó được gọi là Dong Chong Xia Cao có nghĩa là “cỏ mùa hè sâu mùa đông” ( Li et al., 2006a , Li và cộng sự, 2006b ). Theo truyền thống, nó được gọi là Viagra thảo mộc. Nó còn được gọi là nấm sâu bướm vì nó ký sinh Lepidopteran ấu trùng, ký gửi bào tử, phát triển qua côn trùng và cuối cùng ướp xác nó. Sau khi trú đông, nấm phá vỡ cơ thể ký chủ và hình thành chất nền (cơ thể đậu quả) được kết nối với ấu trùng đã chết như thể hiện trong Hình 1 . Hiện tại, có hơn 680 loài thuộc chi đông trùng hạ thảo ( Holliday, Cleaver, & Wasser, 2005 ) nhưng thông thường đông trùng hạ thảo đề cập chính xác đến các loài C. sinensis ( Holliday và Cleaver, 2008 , Mizuno, 1999 ). Cả ấu trùng chết và quả thể đã được sử dụng như một loại thuốc truyền thống và thực phẩm tốt cho sức khỏe trong hàng trăm năm để “bổ phổi và bổ thận” ở Trung Quốc ( Dong và Yao, 2007 , Kuo và cộng sự, 1994 ). Nhiều khía cạnh liên quan đến nghiên cứu về CS đã được xem xét kỹ lưỡng ( Halperin, 1999 ).
đông trùng hạ thảo và các sản phẩm chứa hoạt chất chính đã có mặt ở Trung Quốc và nhiều nước phương Tây; tuy nhiên, bằng chứng khoa học đã được thiết lập về ảnh hưởng sức khỏe của nó còn thiếu. Trong Dược điển Trung Quốc, nó đã được phân loại chính thức là một loại thuốc từ năm 1964. Hơn nữa, việc sử dụng nó đã tăng lên do Hội chứng hô hấp cấp tính nặng (SARS) ở Trung Quốc vào năm 2003 và gần đây đã tuyên bố các phương pháp điều trị chống lại hệ thần kinh, bệnh tim mạch, khối u, lão hóa, hô hấp. , thận, gan, thiểu năng tình dục và tăng lipid máu ( Chen et al., 2006 , Kuo và cộng sự, 2006 , Wang và Shiao, 2000 ). CS được tiếp thị như một chất bổ sung chế độ ăn uống theo cân nhắc của FDA và do đó, có nhu cầu thị trường lớn đối với đông trùng hạ thảo ngày càng tăng ở nhiều quốc gia ( Dong & Yao, 2007 ). Trong TCM, đông trùng hạ thảo luôn được tôn sùng. Sự gia tăng mức độ phổ biến của nó đã dẫn đến việc khai thác quá mức và sau đó là sự khan hiếm các loài hoang dã ( Holliday et al., 2004 , Hsu và cộng sự, 2002 ). Công ước về buôn bán quốc tế các loài nguy cấp ( CITES ) Cơ quan Quản lý Trung Quốc đã chính thức phân loại loại nấm này là một loài có nguy cơ tuyệt chủng ( CITES Management Authority of China, 2012 ). Hơn nữa, các nhà nghiên cứu mong muốn nuôi cấy loài này trên môi trường nhân tạo và đến giữa những năm 1990, CS nuôi trồng nhân tạo đã được bán trên toàn thế giới ( Holliday et al., 2004 , Mizuno, 1999 ). Các phương pháp đầy hứa hẹn như công nghệ nuôi cấy phản ứng sinh học đã được áp dụng để nuôi cấy các chủng sống phân lập từ CS tự nhiên nhằm đáp ứng nhu cầu của con người và giảm áp lực đối với tài nguyên thiên nhiên của loài ( Dong & Yao, 2007 ). Các sản phẩm sợi nấm được nuôi cấy và lên men với các thành phần hoạt tính dược lý tương tự hiện được sử dụng trong thực hành lâm sàng ( Zhu et al., 1998a , Zhu và cộng sự, 1998b ).
Đánh giá này khám phá nhà máy sinh học trị liệu của CS, phương pháp chiết xuất, kỹ thuật được sử dụng để xác định từng nguyên tắc hoạt động và mối liên hệ có thể có với lợi ích sức khỏe tiềm năng của chúng.
Trong 8–10 năm qua, các hoạt động thương mại CS đã tạo ra nhu cầu thị trường khổng lồ, đặc biệt là ở Trung Quốc, Tây Tạng, Nepal và khu vực Himalaya. Ở vùng nông thôn Tây Tạng, thu hái CS đã trở thành nguồn thu nhập quan trọng và đóng góp 40% cho các hộ gia đình địa phương, 8,5% vào GDP năm 2004. Sản lượng hàng năm ở Cao nguyên Tây Tạng ước tính vào năm 2009 là 80–175 tấn và 1 kg sâu bướm được giao dịch với giá 3000 đô la Mỹ (chất lượng thấp nhất) đến hơn 18.000 đô la Mỹ (chất lượng tốt nhất, ấu trùng lớn nhất) vào năm 2008 ( Winkler, 2009 ). Giá trị của 1 kg sâu bướm được ước tính vào khoảng 30.000–60.000 rupee Nepal ở Nepal và khoảng Rs. 100.000 ở Ấn Độ ( Sharma, 2004 ). Trong năm 2011, giá trị của 1 kg sâu bướm đã tăng từ 350.000 lên 450.000 rupee Nepal ở Nepal. Theo một báo cáo gần đây, ở các ngôi làng phía bắc Ấn Độ, một loại nấm trị giá Rs. 150 (khoảng £2 hoặc $3), nhiều hơn mức lương hàng ngày của một người lao động chân tay ( Jeffrey, 2012 ).
Việc khai thác quá mức CS được coi là mối đe dọa lớn đối với môi trường và gây mất cân bằng sinh thái nghiêm trọng. Áp lực khai thác gia tăng có thể dẫn đến sự biến mất hoàn toàn của loài này trong tương lai. Do đó, cần có các chính sách quản lý, thực hành và chiến lược thay thế cho sản xuất quy mô lớn để cứu các loài CS. Cần phải tiến hành nhiều nghiên cứu hơn để đưa ra các chiến lược quản lý hiệu quả nhằm đảm bảo sự tồn tại lâu dài của CS.
Theo nhu cầu gần đây đối với CS, có nhiều nỗ lực trong việc nuôi dưỡng CS một cách giả tạo. Thành tựu sản xuất CS quy mô lớn bằng quá trình lên men là mục tiêu chính của nhiều nhà nghiên cứu để các chủng nấm có thể dễ dàng phân lập từ CS tự nhiên, được sản xuất với số lượng lớn bằng công nghệ lên men ( Wang, 1995 , Âm và Đường, 1995 , Zhu và cộng sự, 1998a , Zhu và cộng sự, 1998b ). Những nỗ lực ban đầu nhằm phát triển một công nghệ hiệu quả để trồng các thể đậu quả đã trở nên vô ích. Một nghiên cứu sơ bộ về thế hệ CS thay thế đã được tiến hành. Sự phá hoại của ấu trùng hepialus bởi CS, sự phát triển và sinh sản của cơ thể sợi nấm trong tan máu của ấu trùng vật chủ, sự phát triển của chất đệm, sự trưởng thành của màng trinh và sự loại bỏ và nảy mầm của ascospores đã được quan sát thấy ( Li, Zeng, Yin, & Huang, 1998 ). Nhưng quá trình lên men ở trạng thái rắn và ngập nước vẫn được sử dụng rộng rãi để sản xuất các thành phần và sinh khối sợi nấm CS. Quá trình lên men dạng lỏng hoặc ngập nước là một hệ thống được ưu tiên để sản xuất hiệu quả các hợp chất có hoạt tính sinh học mong muốn bằng cách nuôi cấy sợi nấm vì các điều kiện có thể được thao tác và tối ưu hóa một cách dễ dàng với khả năng sản xuất sợi nấm cao như đã được chứng minh đối với các loại nấm khác nhau. Nói chung CS phát triển kém ở nhiệt độ trên 21°C ( Dong & Yao, 2010 ). Các nghiên cứu khác nhau đã tập trung vào việc tối ưu hóa các điều kiện tăng trưởng cho canh tác ngập nước và trạng thái rắn.
Một nghiên cứu được thực hiện để tối ưu hóa các yêu cầu dinh dưỡng (17 carbohydrate, 16 hợp chất nitơ, 9 vitamin, 4 nguyên tố đa lượng, 4 nguyên tố vi lượng và 8 tỷ lệ carbon so với nitơ) để canh tác thành công CS trong ngập nước trong đó tối đa là 22 g/ l sinh khối sợi nấm có thể thu được trong môi trường nuôi cấy ngập nước sau 40 ngày ( Dong & Yao, 2005 ). Các điều kiện tăng trưởng và các yếu tố dinh dưỡng tiếp theo đã được tối ưu hóa để tối đa hóa việc sản xuất polysacarit ( Hsieh et al., 2005 , Leung et al., 2005 ), exo-polysaccharid và cordycepin ( Kim & Yun, 2005 ). Nỗ lực so sánh các đặc điểm sinh trưởng của CS với các loại nấm nội sinh khác ở Nepal Himalaya ( Bikash & Jyoti, 2012 ) cho thấy tốc độ sinh trưởng của CS rất chậm so với các loại nấm liên quan khác. Lương và Ngô (2007) đã nghiên cứu tác động của việc cung cấp amoni đối với việc sản xuất cordycepin (3′-deoxyadenosine, một chất tương tự nucleoside) và exopolysacarit (EPS) trong nuôi cấy sợi nấm CS mới (Cs-HK1) ( Leung & Wu, 2007 ).
Nuôi cấy theo phương pháp môi trường rắn được nhiều nhà sản xuất ở Nhật Bản và Hoa Kỳ áp dụng. Trong phương pháp này, chất nền bao gồm các loại ngũ cốc hoặc một túi ngũ cốc hỗn hợp mà sợi nấm được phép phát triển trên đó. Hạt thường là gạo, lúa mì hoặc lúa mạch đen mặc dù nhiều loại ngũ cốc khác nhau được sử dụng. Mặc dù phương pháp này thu hoạch sợi nấm với khả năng thu hồi hoạt chất sinh học tối đa và đây có thể là kỹ thuật giá rẻ nổi tiếng nhưng nhược điểm là sợi nấm chứa hàm lượng chất hạt cao hơn chất CS thực tế. Tương tự Cleaver, Holliday, và Powers (2011) nghiên cứu canh tác CS nhân tạo trên giá thể ( Cleaver et al., 2011 ) và cũng đã báo cáo một phương pháp mới để lai các chủng CS khác nhau nhằm mục đích thu được các chủng có đặc tính kích thích sức khỏe, y học tương đương hoặc được cải thiện so với các chủng CS được trồng trong hoang dã ( Claver, Holliday, & Powers, 2005 ). Các điều kiện lên men rắn được tối ưu hóa thông qua thử nghiệm một yếu tố để thu hồi tối đa polysacarit trong đó bột đậu nành và cám gạo (1:2 w/w) làm cơ chất và đạt được lượng cấy tối ưu (20%), nhiệt độ lên men (26 °C), nước hàm lượng môi trường (60%), độ ẩm tương đối của không khí (60%) và thời gian lên men (7 ngày) ( Wu, Chen, & Hao, 2009 ).
Smith, Rowan và Tân (2000) đã báo cáo việc sử dụng nấm dược liệu vì lợi ích sức khỏe hầu hết có thể ở dạng chiết xuất, cô đặc hoặc bột hiện được gọi là dược phẩm nấm ( Smith et al., 2000 ). CS là nguồn phong phú các thành phần hóa học mới có hoạt tính sinh học với kiến trúc cấu trúc đa dạng ( Bảng 1 ). Nó chủ yếu chứa nhiều hoạt chất, bao gồm ribonucleoside, mannitol, sterol, axit hữu cơ, polysacarit, protein, polyamines, axit amin dipeptide, vitamin (Vit E, K và vitamin tan trong nước B1, B2 và B12) và nhiều loại các nguyên tố vi lượng (K, Na, Ca, Mg, Fe, Cu, Mn, Zn, Pi, Se, Al, Si, Ni, Sr, Ti, Cr, Ga, V và Zr) ( Zhu et al., 1998a ) . Một số thành phần có khả năng hoạt tính sinh học ở trên được thảo luận dưới đây và tác dụng dược lý của chúng được nhấn mạnh trong ban 2 .
thành phần | chức năng dược lý | Người giới thiệu | |
---|---|---|---|
polysacarit | |||
– | hoạt động chống oxy hóa | Li và cộng sự, 2001a , Yu và cộng sự, 2006a , Yu và cộng sự, 2006b Và Trương và cộng sự. (2011) | |
CS-F30 và CS-F10 | Tác dụng hạ đường huyết và hạ lipid máu | Kiho, Ookubo, Usui, Ukai và Hirano (1999) , Kiho et al. (1996) | |
Phần polysacarit từ CS (PSCS) | chống bệnh bạch cầu | Chen và cộng sự. (1997) | |
Mannoglucan | Hoạt tính gây độc tế bào | Vũ và cộng sự. (2007b) | |
Exo-polysacarit | Tác dụng điều hòa miễn dịch và chống ung thư | Dương và cộng sự, 2005 , Zhang và cộng sự, 2005 Và Zhang, Li, Qiu, Chen và Zheng (2008) | |
Phần axit polysacarit (APSF) | tác dụng điều hòa miễn dịch | Chen, Zhang, Wenbin Shen và Wang (2010) Và Chen và cộng sự. (2012) | |
Heteropolysacarit (PS-A) | tăng cholesterol máu | Kim (2010) | |
| |||
nucleoside | |||
Adenosine | Tác dụng điều hòa miễn dịch & dược động học, bảo vệ tim mạch | Kim (2010) Và Yu, Zhao, Zhu và Li (2007) | |
guosine | tác dụng điều hòa miễn dịch | Kim (2010) | |
đông trùng hạ thảo | Tác dụng chống ung thư, tác dụng dược động học, tác dụng điều hòa miễn dịch, chống thiếu máu | Kodama và cộng sự, 2000 , Nakamura và cộng sự, 2006 , Pao và cộng sự, 2012 , Tsai và cộng sự, 2010 , Yoshikawa và cộng sự. (2011) Và Châu và cộng sự. (2008) | |
Sterol | |||
Ergosterol | Tác dụng chống ung thư | Matsuda và cộng sự. (2009) Và Vũ và cộng sự. (2007a) | |
β-Sitosterol | Tác dụng chống ung thư | Matsuda và cộng sự. (2009) Và Vũ và cộng sự. (2007a) | |
5a,8a-Epidioxy-24(R)-metylcholesta-6,22-dien-3b- d -glucopyranoside | Tác dụng chống ung thư | Bok et al. (1999) | |
5,6-Epoxy-24(R)-metylcholesta-7,22-dien-3b-ol | Tác dụng chống ung thư | Bok et al. (1999) | |
5α,8α-Epidioxy-22E-ergosta-6,22-dien-3β-ol | Tác dụng chống ung thư | Matsuda và cộng sự. (2009) | |
5α,8α-Epidioxy-22E-ergosta-6,9(11),22-trien-3β-ol | Tác dụng chống ung thư | Matsuda và cộng sự. (2009) | |
5α,6α-Epoxy-5-ergosta-7,22-dien-3β-ol | Tác dụng chống ung thư | Matsuda và cộng sự. (2009) | |
thành phần protein | Hoạt động hạ huyết áp và giãn mạch | Chiou et al. (2000) | |
| |||
protein | |||
CSAP | Hoạt tính kháng khuẩn | Trịnh và cộng sự. (2006) | |
Cordymin (peptit) | Các hoạt động chống viêm và chống đau | Qian et al. (2012) | |
Cordycedipeptide A (cyclodipeptide) | Hoạt động gây độc tế bào | Cảnh và cộng sự. (2005) | |
Cordyceamides A và B | Hoạt động gây độc tế bào | Giả và cộng sự. (2009) |
Polysacarit là chất đóng góp chính cho hầu hết các hoạt động sinh học của CS. Thật khó để sử dụng chúng làm chất đánh dấu để kiểm soát chất lượng do cấu trúc phức tạp và khối lượng phân tử lớn. Guan, Zhao, Feng, Hu và Li (2011) đã thử phân tích định tính và mô tả đặc tính của polysacarit bằng phương pháp gọi là “ánh xạ saccharide” ( Guan & Li, 2010 ) và báo cáo một loạt các monome tạo nên khối đại phân tử của polysacarit chứa chính (1→4)-β, (1→4) -α, (1→6)-α-glucosidic và 1→4-β- d -mannosidic liên kết, v.v. ( Guan et al., 2011 ). Ngoài ra, hàm lượng carbohydrate được chiết xuất bằng phương pháp chiết xuất chất lỏng điều áp (PLE) trong cả CS tự nhiên và nuôi cấy được so sánh và 10 monosacarit (rhamnose, ribose, arabinose, xyloza, mannose, glucose, galactose, mannitol, fructose và sorbose) được xác định bằng GC– MS ( Quan, Yang, & Li, 2010 ). Methyl hóa, suy thoái Smith, acetolysis, quang phổ NMR ( 1 H, 13 độ C, 13 C– 1 H 2D-COSY) và các nghiên cứu thủy phân bằng axit đã được tiến hành để xác định đặc điểm cấu trúc của d -glucan (xương sống bao gồm (1→4)- d -glucosyl và mang một (1→6)-liên kết d -glucosyl), thể hiện đặc tính kích thích miễn dịch ( Yalin, Cuirong, & Yuanjiang, 2006 ) và trong một nghiên cứu khác, phân tích cấu trúc của một chất trung tính (1→3), (1→4)-β- d -glucan đã được thực hiện bằng phép đo quang phổ NMR và IR ( Yalin, Cuirong, & Yuanjiang, 2005 ). Mannitol (rượu đường) là một hợp chất khác được phát hiện có hoạt tính chống oxy hóa được chiết xuất từ tự nhiên (32,22 ± 1,5 g/100 g dịch chiết) và sợi nấm nuôi cấy (21,77 ± 0,73 g/100 g dịch chiết) của CS ( Dong & Yao ). , 2007 ). Một mannoglucan trung tính (các đơn vị Man và Glc theo tỷ lệ mol 1:9) được đặc trưng bằng cách sử dụng phân tích hóa học và quang phổ NMR và IR, và cấu trúc của nó cho thấy xương sống của α- d -glucan với (1→4) và (1→3) -liên kết và chuỗi bên của α- d -(1→6)-Manp được gắn vào xương sau thông qua O-6 của các gốc α-(1→3)-Glcp ( Wu, Hu, Pan, Zhou, & Châu, 2007b ). Từ ascocarps của CS, bằng cách chiết xuất nước nóng và phân đoạn etanol, galactomannan đã được tinh chế từ CS-I và cấu trúc của nó được làm sáng tỏ bằng cách sử dụng quá trình oxy hóa định kỳ, phân hủy Smith, phân tích methyl hóa, thủy phân axit một phần và Phép đo phổ 13 C NMR, tiết lộ rằng nó chứa lõi mannan dưới dạng (1→2)-dư lượng liên kết α- d -mannopyranosyl và galactosyl dưới dạng nhánh chứa (1→3), (1→5) và (1→6)- liên kết- d -galactofuranosyl, (1→4)-liên kết- d -galactopyranosyl dư lượng ( Toshio, Naoko, & Haruki, 1977 ) và trong một nghiên cứu khác, một loại protein nhỏ chứa galactomannan từ chiết xuất natri cacbonat 5% của CS đã được tìm thấy ( Kiho, Tabata, & Ukai, 1986 ). Nie et al. (2011) đã nghiên cứu các đặc điểm cấu trúc của polysacarit ưa nước (CBHP) bằng cách sử dụng phân tích methyl hóa và quang phổ 2D NMR. Theo họ, cấu trúc polysaccharid được cấu tạo chủ yếu từ glucose (95,19%) cấu tạo nên xương sống nơi Glc p các đơn vị được liên kết thông qua liên kết α-1,4 (65,7%), tiếp theo là t-Glc p (20,7%), 1,2,3,6-Glc p (4,1%), 1,2,4,6-Glc p (3,0%), 1,3,6-Glc p (2,0%), 1,4,6-Glc p (1,6%) và 1,2-Man p (1,9%) và 1,3-Gal p (1,0%) và các điểm phân nhánh nằm ở O-2 hoặc O-6 của Glc p với đầu cuối α- d -Glc p như chuỗi bên. Lượng vết của 1,2-Man p và 1,3-Gal p các liên kết có thể nằm ngẫu nhiên trong các chuỗi bên ( Nie et al., 2011 ).
Nucleoside được cho là một trong những thành phần hoạt động chính trong CS ( Li, Li, Dong, & Tsim, 2001b ), trong đó adenosine và cordycepin đang được sử dụng làm chất đánh dấu để kiểm soát chất lượng. Hàm lượng nucleoside khác nhau giữa CS tự nhiên và CS nuôi cấy ( Li et al., 2001c ). Nhiều nucleoside khác đã được tìm thấy bao gồm uridine, một số cấu trúc riêng biệt của deoxyuridine, adenosine, 2′-3′-dideoxyadenosine, hydroxyethyladenosine, cordycepin triphosphate, guanidine, deoxyguanidine, không tìm thấy ở bất kỳ nơi nào khác trong tự nhiên. Adenosine và Cordycepin (3′-deoxyadenosine) là các thành phần có hoạt tính dược học thể hiện nhiều tác dụng dược lý như điều hòa miễn dịch, chống oxy hóa, v.v. Cordycepin ban đầu được chiết xuất từ Đông trùng hạ thảo militaris. Trần và Chu (1996) đặc trưng cordycepin và 2′-deoxyadenosine, sử dụng cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) và quang phổ hồng ngoại (IR) trong dịch chiết CS ( Chen & Chu, 1996 ). Trong một nghiên cứu đánh giá chất lượng của CS, Li và cộng sự, 2006a , Li và cộng sự, 2006b xác định sự hiện diện của cordycepin trong CS bằng các phương pháp phân tích như điện di mao quản, HPLC và cũng báo cáo nó như một nguyên tắc hoạt động ( Li và cộng sự, 2006a , Li và cộng sự, 2006b ). Hơn nữa, phải đảm bảo có sự hiện diện của cordycepin để xác thực CS thật. Một số phương pháp phân tích và kỹ thuật nhận dạng khác đã được nghiên cứu như RP-HPLC ( Shiao et al., 1994 , Yu và cộng sự, 2006a , Yu et al., 2006b ), HPLC–ESI-MS ( Huang, Guo, Liang, & Chen, 2004 ), và HPLC-DAD ( Jiang, Liu, Li, & Jin, 2008 ) đã được sử dụng để xác định cordycepin . Ngoài adenosine và cordycepin, một số nucleoside và nucleobase khác đã được báo cáo trong chiết xuất nước của stroma và sâu bướm của CS như cytosine, uracil, cytidine, hypoxanthine, uridine, thymine, adenine, inosine, guanosine và thymidine ( Yuan, Zhao, Wang, Kuang, & Lưu, 2008 ).
Ergosterol, một loại sterol chính được xác định trong CS bằng HPLC ( Li và Li, 1991 , Li và cộng sự, 2004 ) và tồn tại ở hai dạng, là ergosterol tự do và ergosterol ester hóa, có các chức năng sinh lý khác nhau ( Yuan, Wang, Liu, Kuang, & Zhao, 2007 ). Trong một nghiên cứu, hai sterol được phân lập từ chiết xuất metanol được phát hiện có hoạt tính chống khối u và cấu trúc của nó được thiết lập bằng quang phổ 1D và 2D NMR ( Bok, Lermer, Chilton, Klingeman, & Towers, 1999 ). Cholesterol, campesterol và β-sitosterol bao gồm ergosterol trong CS tự nhiên (hoang dã) được xác định bằng phương pháp chiết xuất chất lỏng có áp suất (PLE), tạo dẫn xuất trimethylsilyl (TMS) và phân tích GC–MS ( Yang, Feng, Zhao, & Li, 2009 ). Những phytosterol này đóng vai trò quan trọng trong điều trị ung thư ruột kết, tuyến tiền liệt, ung thư vú và hoạt tính sinh học của chúng rất hữu ích trong việc làm sáng tỏ các chỉ định điều trị CS.
Ngoài các thành phần chính trên, CS còn chứa protein, peptide, polyamines, tất cả các axit amin thiết yếu và một số dipeptide tuần hoàn không phổ biến, bao gồm cyclo-[Gly-Pro], cyclo-[Leu-Pro], cyclo-[Val-Pro] , xích lô-[Ala-Leu], xích lô-[Ala-Val] và xích lô-[Thr-Leu]. Một số trong số này được phát hiện là có hoạt tính chống khối u, kháng vi-rút và kháng sinh mạnh. Các dipeptide tuần hoàn như cyclo-(Leu-Pro) và cyclo-(Phe-Pro) được phát hiện có tác dụng kháng khuẩn và có đặc tính chống đột biến chống lại sự phát triển của cầu khuẩn ruột kháng vancomycin (VRE) và nấm men gây bệnh ( Rhee, 2004 ). Một nghiên cứu cho thấy tác dụng ức chế của các dipeptide tuần hoàn (được sản xuất bởi vi khuẩn) đối với việc sản xuất aflotoxin ( Yan et al., 2004 ). Hàm lượng protein trong ấu trùng chết (29,1%), quả thể (30,4%) và sợi nấm lên men (14,8%) khác nhau. Hồ sơ axit amin liệt kê ba loại axit amin chính (axit glutamic, axit aspartic và arginine) trong cơ thể đậu quả của ấu trùng ( Hsu et al., 2002 ). Cordymin, một peptide được tinh chế từ nấm dược liệu CS thể hiện hoạt tính chống viêm và chống đau ( Qian, Pan, & Guo, 2012 ). Các hoạt động hạ huyết áp và giãn mạch được đóng góp bởi các thành phần protein của CS ( Chiou, Chang, Chou, & Chen, 2000 ). Lần đầu tiên, một loại protein chống vi khuẩn (CSAP) từ sợi nấm nuôi cấy đã được tinh chế và đặc trưng bằng sắc ký và TRANG WEB SDS. CSAP thể hiện hoạt tính kháng vi khuẩn (60%) chống lại vi khuẩn Gram dương và Gram âm và cải thiện độ ổn định nhiệt độ nhưng không thể hiện hoạt tính ngưng kết huyết ( Zheng et al., 2006 ). Một cyclodipeptide mới có tên là Cordycedipeptide A và các dipeptide biến đổi có tên là Cordyceamides A và B, đã được phân lập từ chất lỏng nuôi cấy CS và các cấu trúc đã được làm sáng tỏ bằng kỹ thuật 1D và 2D NMR. Người ta thấy rằng nó thể hiện các hoạt động gây độc tế bào đối với các tế bào L-929, A375 và Hela ( Jia et al., 2009 , Jing và cộng sự, 2005 ).
Một số hợp chất khác như polyamines (1,3-diamino propane, cadaverine, tinh trùng, tinh trùng và putrescine), axit béo tự do (axit lauric, axit myristic, axit pentadecanoic, axit palmitoleic, axit palmitic, axit linoleic, axit oleic, axit stearic, axit docosanoic và axit lignoceric) cũng đã được xác định ( Mishra & Upadhyay, 2011 ).
Một số phương pháp chiết xuất sử dụng dung môi được sử dụng để phân lập các hợp chất có hoạt tính sinh học chọn lọc ( Chen, Wanga, Nieb, & Marcone, 2013 ). Mỗi chiết xuất thể hiện các hoạt động sinh học mạnh mẽ. Một số nghiên cứu về chiết xuất CS bằng dung môi được thảo luận ngắn gọn dưới đây và sơ đồ quy trình xử lý các hoạt chất sinh học từ CS được trình bày trong Hình 2 .
Nước là một phân tử phân cực cao, chiết xuất các hợp chất phân cực như nucleoside và polysacarit của CS và tỷ lệ nước so với vật liệu đã được nghiên cứu để thu được phần polysacarit tối đa. Một nghiên cứu đã báo cáo các điều kiện chiết xuất tốt nhất: nước: bột CS = 2,5:1, pH 7,5–8,0 và thời gian chiết xuất 24 giờ ( Sun, Zhang, & Lei, 2003 ). Năng suất khai thác nước nóng có thể thay đổi trong khoảng 25–30% và có những lợi ích sức khỏe tiềm năng như hoạt động chống oxy hóa ( Li et al., 2003 , Yamaguchi và cộng sự, 2000b ).
Methanol và etanol và/hoặc dung dịch nước metanol và etanol cũng là những dung môi tốt để chiết xuất các hoạt chất sinh học từ CS. Những chiết xuất cồn này rất giàu hoạt chất sinh học rất mạnh như nucleoside, polysacarit, protein. Chiết xuất Ethanolic cho thấy hoạt tính chống oxy hóa mạnh ( Yamaguchi et al., 2000b ), duy trì chức năng tế bào β và cung cấp khả năng bảo vệ tái tạo ( Kan et al., 2012 ). Chiết xuất metanol thu được từ chất lỏng nuôi cấy CS cũng cho thấy tác dụng gây độc tế bào đối với các dòng tế bào ung thư ( Jia et al., 2009 ). Thông tin thêm về tác dụng dược lý của các chất chiết xuất như vậy hoặc các phần tinh khiết của chất chiết xuất sẽ được thảo luận trong phần sau.
Dịch chiết etyl axetat của CS chứa một nhóm hợp chất khác với các hợp chất thường thấy trong dịch chiết nước và cồn. Mặc dù năng suất trong phương pháp này thấp, nhưng nó chứa carbohydrate, adenosine, ergosterol và một lượng nhỏ cordycepin, trong đó ergosterol và các hợp chất liên quan được xác định là một loại thành phần hoạt tính chính góp phần vào trong ống nghiệm gây độc tế bào. Nó gây ra quá trình chết theo chương trình trong các tế bào HL60 bệnh bạch cầu tiền tủy xương ở người với ED 50 ± 25 μg/ml trong 2 ngày điều trị ( Zhang, Wu, Hu, & Li, 2004 ) và ức chế sự phát triển của các dòng tế bào ung thư ( Wu, Zhang, & Leung , 2007a ). Nghiên cứu sâu hơn được sử dụng để hiểu các đặc điểm cấu trúc và hiệu quả của các hợp chất hoạt động trong chiết xuất etyl axetat. Chiết xuất ether dầu hỏa được báo cáo là có hoạt tính chống oxy hóa mạnh, đáp ứng miễn dịch tế bào và dịch thể và tác dụng điều hòa miễn dịch ( Wu et al., 2006 , Wu và cộng sự, 2007a ).
Trong những năm gần đây, khai thác sử dụng CO 2 trên tới hạn đã nổi lên như một công nghệ thay thế có ứng dụng rộng rãi trong ngành hóa chất và thực phẩm. Quá trình này không sử dụng bất kỳ dung môi hữu cơ độc hại nào để chiết xuất và được thực hiện ở điều kiện nhẹ hơn khiến nó trở thành dung môi tốt nhất để chiết xuất các hợp chất hoạt tính sinh học (đặc biệt là không phân cực) ở dạng tinh khiết nhất. Có rất nhiều tài liệu liên quan đến cơ bản và ứng dụng của chiết xuất chất lỏng siêu tới hạn trong các lĩnh vực khác nhau ( Camila & Meireles, 2010 ). Dịch chiết etanolic của CS được phân đoạn bằng CO 2 siêu tới hạn làm dung môi rửa giải và các phân đoạn này cho thấy khả năng loại bỏ mạnh mẽ và ức chế chọn lọc sự phát triển của tế bào ung thư đại trực tràng và tế bào gan bằng quá trình chết theo chương trình ( Wang, Won, Yu, & Su, 2005 ).
Nhiều nghiên cứu trong ống nghiệm Và trong cơ thể sống hỗ trợ rằng CS có các hoạt động sinh học và tiềm năng dược lý đa dạng. CS ở dạng tự nhiên và các sản phẩm sợi nấm lên men thể hiện nhiều tác dụng dược lý ở thận, miễn dịch, gan, hệ thần kinh và tim mạch cũng như hoạt động chống ung thư ( Yin and Tang, 1995 , Zhu và cộng sự, 1998a , Zhu và cộng sự, 1998b ). Chủ yếu là polysacarit, nucleoside và các dẫn xuất của nó (hoặc đã được sửa đổi), và cyclosporine như các chất chuyển hóa thứ cấp là các phân số hoạt động, thể hiện các lợi ích sức khỏe mạnh mẽ. Chiết xuất nước (chủ yếu chứa polysacarit) và chiết xuất rượu của CS được sử dụng phổ biến nhất cho trong ống nghiệm Và trong cơ thể sống học.
Về cơ bản, các chất thích nghi thuộc về một nhóm các chất điều hòa trao đổi chất làm tăng khả năng thích nghi của sinh vật với các yếu tố môi trường và tránh thiệt hại từ các yếu tố đó. Các nghiên cứu cho thấy CS cũng sở hữu một phương pháp khắc phục tiềm năng đối với các yếu tố có hại như căng thẳng, lão hóa, v.v. Trong một thí nghiệm nghiên cứu tác dụng chống lão hóa của chiết xuất CS bằng nước nóng, những con chuột già đi d -galactose và chuột bị thiến đã được điều trị. Nghiên cứu tương tự đã báo cáo các đặc tính chống lão hóa của CS ( Chen & Li, 1993 ). Nghiên cứu chỉ ra rằng chiết xuất CS cải thiện hoạt động của superoxide dismutase, glutathione peroxidase và catalase, đồng thời làm giảm mức độ peroxid hóa lipid và hoạt động monoamine oxidase ở chuột già ( Ji et al., 2009 ). Hơn nữa, chiết xuất nước nóng của sợi nấm ((150 mg/kg/ngày) cho thấy sự ức chế đáng kể chống lại sự gia tăng cholesterol toàn phần và giảm nồng độ phosphatase kiềm ở chuột được cho uống bằng chiết xuất CS ( Koh, Kim, Kim, Song, & Suh, 2003 ).
Loại thảo mộc Trung Quốc này rất hữu ích trong việc ngăn ngừa và điều trị nhiều bệnh liên quan đến tuổi tác. Kuo, Tsai, Shiao, Chen và Lin (1996) báo cáo rằng CS có chứa các thành phần ức chế miễn dịch không gây độc tế bào trên các tế bào đơn nhân của con người. Các phân đoạn khác nhau (phân đoạn cột) của chiết xuất MeOH, đã được thử nghiệm để tạo ra phản ứng tăng sinh tế bào lympho, hoạt động của tế bào giết người tự nhiên (NK) và phytohemagglutinin (PHA) kích thích interleukin-2 (IL-2) và yếu tố hoại tử khối u-alpha (TNF- α) trên tế bào đơn nhân người (HMNC). Trong số 15 phân số cột, hai phân số (CS-36-39 và CS-48-51) ức chế đáng kể phản ứng phát sinh phôi (IC 50 = 71,0 ± 3,0 và 21,7 ± 2,0 μg/ml, tương ứng), hoạt động của tế bào NK (IC 50 = 25,0 ± 2,5 và 12,9 ± 5,8 μg/ml, tương ứng), quá trình sản xuất IL-2 của HMNC được kích thích bởi PHA (IC 50 = 9,6 ± 2,3 và 5,5 ± 1,6 μg/ml, tương ứng) và cản trở sản xuất TNF-α trong môi trường nuôi cấy HMNC (IC 50 = 2,7 ± 1,0 và 12,5 ± 3 μg/ml, tương ứng) ( Kuo và cộng sự, 1996 ). Và cùng một nhóm nghiên cứu đã tiến hành thử nghiệm lâm sàng trên người (năm đối tượng nam; tuổi trung bình là 35) và báo cáo rằng chiết xuất metanol từ quả thể của CS có chứa các chất điều hòa miễn dịch, gây ra sự điều hòa chức năng của tế bào dịch rửa phế quản phế nang (BALF). Trong nghiên cứu này, lipopolysacarit (LPS) gây ra sự tăng sinh tế bào dịch rửa phế quản phế nang (BALF), sản xuất các cytokine gây viêm và biểu hiện gen được đánh giá sau khi điều trị bằng chiết xuất CS MeOH. Nó cho thấy tác dụng ức chế (92,6% ở mức 200 mg/ml) đối với sự tăng sinh tế bào BALF khi được kích thích bằng LPS. Hơn nữa, CS-19-22 trong số 15 phân số phụ, cho thấy các hoạt động tốt hơn: (1) ức chế sự tăng sinh tế bào BALF (phụ thuộc vào liều lượng), (2) giảm IL-1b, IL-6, IL-8, IL-10 và TNF Sản xuất -α trong nuôi cấy tế bào BALF được kích hoạt LPS, (3) tăng cường sản xuất IL-12 và sản xuất IFN-g trong các tế bào BALF được kích hoạt ( Kuo et al., 2001 ).
Trong một nghiên cứu để tìm ra tiềm năng của một số loại thảo mộc Trung Quốc viz. Atractylodes ovata , Anqelica sinensis , C. sinensis , Rượu lucidum , Codonopsis pilosula Và Homo sapiens trên bệnh lupus ban đỏ hệ thống (SLE) là một bệnh tự miễn dịch quan trọng. CS đã cải thiện khả năng sống sót và ức chế sản xuất kháng thể DNA chống ds ở chuột lupus (NZB/NZW F1) và cũng cải thiện quá trình sản xuất IL-2 bị lỗi ( Chen et al., 1993 ). Liu, Lu và Ji (1992) gợi ý rằng CS có thể được sử dụng như một cách tiếp cận liệu pháp điều chỉnh phản ứng sinh học (BRMT) trong điều trị bệnh bạch cầu. Tương tự, một nghiên cứu khác đã báo cáo rằng CS có thể tăng cường hoạt động của tế bào NK và cải thiện biểu hiện dấu hiệu CD16 trên tế bào lympho và khả năng liên kết với tế bào K562 ( Liu et al., 1992 ). Hơn nữa, phân đoạn axit polysacarit (APSF), từ dạng biến dạng của CS đã kích thích hoạt động trên các đại thực bào nơi tăng biểu hiện của TNF-α, IL-12 và iNOS, đồng thời làm giảm biểu hiện IL-10 của tế bào Ana-1 ( Chen , Yuan, Wang, Song, & Zhang, 2012 ). Mặt khác, chiết xuất CS đã được tìm thấy để tăng cường biểu hiện kháng nguyên MHC lớp II trên các tế bào HA22T/VGH của dòng tế bào ung thư gan người HA22T/VGH. Sự duy trì miễn dịch của kháng thể đơn dòng (MAb) L243 chống lại vùng HLA DR của các kháng nguyên MHC lớp II đã được phân tích bằng phương pháp đo huỳnh quang tế bào trong đó chiết xuất CS điều chỉnh biểu hiện kháng nguyên MHC lớp II làm cho việc giám sát miễn dịch của vật chủ chống lại các tế bào khối u hiệu quả hơn ( Chiu et al., 1998 ).
Một hợp chất tinh khiết (H1-A) được phân lập từ CS được báo cáo là có tác dụng điều hòa miễn dịch tốt bằng cách cải thiện khả năng sống sót của chuột lupus làm giảm sản xuất anti-ds-DNA. Trong biểu hiện lâm sàng, nhóm được điều trị đã giảm bệnh hạch bạch huyết, chậm tiến triển protein niệu và cải thiện chức năng thận và tiết lộ rằng không có thay đổi đáng kể nào trong sự lắng đọng phức hợp miễn dịch ( Lin et al., 1999 , Yang và cộng sự, 1999 ). Tác dụng ức chế miễn dịch của CS đã được chứng minh trong đó CS cho thấy tác dụng ức chế đối với phản ứng miễn dịch tức là. chức năng thực bào của bạch cầu trong máu ngoại vi, phản ứng phân bào của tế bào lympho lách với Con A, và nuôi cấy tế bào lympho hỗn hợp và giải phóng đại thực bào IL-1 do LPS gây ra ( Zhu & Yu, 1990 ). Trong một nghiên cứu khác, người ta đã nghiên cứu tác dụng ức chế của chế phẩm CS (CS-1) đối với phản ứng miễn dịch gây thải ghép nội tạng. Hơn nữa, CS-1 có thể kéo dài thời gian sống sót của quả tim được ghép mà không gây nhiễm trùng và nó không gây tác dụng phụ có hại cho cơ quan quan trọng ( Zhang & Xia, 1990 ).
Các exo-polysacarit thu được từ quá trình lên men chìm của CS góp phần vào hoạt động điều hòa miễn dịch bằng cách tăng cường tổng hợp cytokine, biểu hiện CD11b và thực bào ( Kuo, Chang, Cheng, & Wu, 2007 ). Đặc biệt là các exo-polysacarit (Fr. A) chịu trách nhiệm sản xuất TNF-α, IL-6 và IL-10 phụ thuộc vào liều lượng, làm tăng biểu hiện bề mặt của CD11b trong bạch cầu đơn nhân và bạch cầu đa nhân trung tính (PMN), đồng thời tăng thực bào trong bạch cầu đơn nhân và PMN. Mặt khác, các polysacarit nội bào (Fr. B) gây ra sự giải phóng TNF-α vừa phải, biểu hiện CD11b và quá trình thực bào.
Một số thử nghiệm trên người đã được tiến hành để kiểm tra hiệu quả của CS đối với việc suy giảm chức năng miễn dịch đối với bệnh nhân suy thận mãn tính (CRF) (nhóm nghiên cứu) và kết quả cho thấy giảm OKT3, OKT4 và OKT4/OKT8 trong CRF, tỷ lệ xuất hiện của OKT4 và OKT4 /OKT8 đến nồng độ albumin và Hb huyết tương. Nó cũng cải thiện chức năng thận và tăng tỷ lệ OKT4 và OKT4/OKT8 ( Guan, Hu, & Hou, 1992 ).
Việc điều chế CS (Cs-Cr) ở dạng tinh thể có thể làm tăng đáng kể các tế bào trợ giúp T và tỷ lệ Lyt-1/Lyt-2 (T trợ giúp so với tế bào ức chế T) cả trong máu ngoại vi và lá lách của chuột được điều trị và cũng có thể bảo vệ chống lại thuốc ức chế miễn dịch tác dụng của prednisolone axetat và cyclophosphamide đối với tế bào hỗ trợ T ( Chen, Chen, Sun, Hsieh, & Henshall, 1991 ). Theo quan điểm này, có khả năng sử dụng CS để điều trị bệnh nhân suy giảm miễn dịch hoặc ức chế miễn dịch ( Guan et al., 1992 ).
Chiết xuất cồn của CS đóng vai trò bảo vệ quan trọng chống lại viêm cơ tim ở chuột do virus gây ra bằng cách tạo ra IFN-γ và điều hòa tế bào lympho T ( Li et al., 2006a , Li và cộng sự, 2006b ) và mô hình cấy vi khuẩn túi khí tương tự đã được sử dụng để nghiên cứu hiệu quả bảo vệ của chiết xuất sợi nấm CS đối với nhiễm trùng liên cầu khuẩn nhóm A (GAS) ( Kuo và cộng sự, 2005 ). Mặt khác, chiết xuất nước cho thấy tác dụng điều hòa miễn dịch kiêm tác dụng chống viêm trong đó CS đóng vai trò là chất kích hoạt và chất cảm ứng của các tế bào Dendritic chưa trưởng thành (DC) bằng cách kích thích biểu hiện bề mặt của CD11c, CD205, CD40, CD80, CD83, CD86 và MHC-II làm cho DC chưa trưởng thành trưởng thành với hoạt động nội tiết giảm, thúc đẩy sự phân cực Th1. Điều này chỉ ra rằng CS có khả năng điều chỉnh các DC theo hướng miễn dịch qua trung gian tế bào ( Li et al., 2009 ). Cơ chế này có thể được mô tả rõ ràng trong Hình 3 . Có rất ít nghiên cứu cung cấp thông tin về tác dụng điều hòa miễn dịch của CS ( Chen, 1983 , Trần, 1985 , Trương, 1985 ).
CS thu hút nhiều mối quan tâm nghiên cứu về hoạt động chống oxy hóa của nó. Li, Su, Dong và Tsim (2002) đã báo cáo rằng chiết xuất sợi nấm thu được từ xơ cứng và chất nền của CS cho thấy các hoạt động chống oxy hóa tương tự như peroxid hóa lipid, xanthine oxidase và gây ra các xét nghiệm tán huyết ( Li et al., 2002 ). Các chiết xuất dung môi khác nhau của CS có hiệu quả trong việc loại bỏ các gốc hydroxyl ( Cai, Zhang, Chen, & Yin, 2004 ), các gốc anion superoxide ( Zhang, Pu, Yin, & Zhong, 2003 ). Cả nước và chiết xuất ethanol của CS đều cho thấy tác dụng nhặt rác đối với các loại oxy phản ứng (ROS) bằng cách ức chế sự hình thành malondialdehyde bởi chất tạo peroxynitrite SIN-1 ( Yamaguchi et al., 2000a , Yamaguchi và cộng sự, 2000b ). Tác dụng chống oxy hóa tương tự của chiết xuất nước nóng từ sợi nấm tự nhiên và nuôi cấy của CS sử dụng sáu trong ống nghiệm xét nghiệm đã được điều tra. Các chất chiết xuất cho thấy hiệu quả vượt trội trong việc ức chế peroxid hóa linoleic với tỷ lệ ức chế trên 90%, các hoạt động nhặt rác đối với anion superoxide và các gốc hydroxyl thấp hơn một chút so với BHT, các hoạt động nhặt rác DPPH ức chế trên 80% và khả năng khử vừa phải và hoạt tính thải sắt ion ( Dong & Yao, 2007 ) ( Hình 4 ).
Nấm dược liệu hứa hẹn nhất cho điều trị ung thư và đông trùng hạ thảo đã được sử dụng hiệu quả như một loại thảo mộc chống khối u trong y học Trung Quốc ( Ji, 1999 ). Một số nghiên cứu trước đây đã báo cáo các hoạt động chống khối u của CS tự nhiên và được trồng trọt ( Yamaguchi et al., 1990 ). Về cơ bản chiết xuất nước hoặc rượu có chứa các hợp chất phân cực góp phần chống ung thư. Tác dụng chống ung thư tương tự của chiết xuất nước ấm của CS khô đã được nghiên cứu, trong đó ung thư biểu mô cổ trướng Ehrlich (EAC), dị hợp với chuột ICR, Meth A fibrosarcoma (Meth A), tổng hợp với chuột BALB/c được sử dụng làm dòng tế bào khối u đích và báo cáo rằng tác dụng chống khối u của chiết xuất có thể được trung gian thông qua hoạt động điều hòa miễn dịch của nó ( Yoshida et al., 1989 ). Nakamura và cộng sự. (1999) đã nghiên cứu tác dụng của chiết xuất nước CS (WECS) đối với sự di căn gan của ung thư biểu mô phổi Lewis (LLC) và tế bào u ác tính B16 (B16) ở chuột. Trong cả hai thí nghiệm LLC và B16, chiết xuất nước cho thấy tác dụng gây độc tế bào mạnh, không phải do cordycepin mà chỉ vì các thành phần khác ( Nakamura et al., 1999 ) và hơn nữa, có báo cáo rằng cordycepin có tác dụng ức chế sự phát triển của khối u ác tính ở chuột và tế bào ung thư biểu mô phổi bằng cách kích thích thụ thể adenosine A3 trên tế bào khối u ( Nakamura et al., 2006 ). Trong các nghiên cứu gần đây, chiết xuất nước từ quả thể khô của CS nuôi cấy, được đánh giá về tác dụng chống ung thư, trong đó cordycepin là một chất chuyển màu hiệu quả trong chiết xuất nước và cho thấy tác dụng chống ung thư trên các tế bào B16–BL6, tế bào LLC, Các tế bào u xơ sợi ở người HT1080 (HT1080) và tế bào ung thư biểu mô ruột kết ở người (CW-2) bằng cách kích thích thụ thể adenosine A3 (A3-R) ( Yoshikawa et al., 2011 ) và theo sau đó là hoạt hóa Glycogen Synthase Kinase-3β và Cyclin D1 triệt tiêu bằng cách sử dụng xét nghiệm liên kết đồng vị phóng xạ ( Yoshikawa et al., 2008 ).
Chiết xuất metanol từ thể quả của CS cho thấy tác dụng ức chế các dòng tế bào khối u (tế bào K562, Vero, Wish, Calu-1 và Raji) ( Kuo et al., 2006 ) và được báo cáo rằng khối u có trọng lượng phân tử thấp các chất ức chế tăng trưởng tế bào, ngoài cordycepin và polysacarit trong CS chịu trách nhiệm cho tác dụng này. Vai trò của chiết xuất ethanol của CS (CS-II) như một tác nhân tăng cường miễn dịch trong điều trị ung thư và bệnh nhân suy giảm miễn dịch đã được báo cáo ( Xu, Peng, Chen, & Chen, 1992 ).
Hai sterol chống ung thư (ergosterol) được phân lập từ dịch chiết trong metanol của sợi nấm nuôi cấy CS, được phát hiện có tác dụng ức chế (dạng glycosterol hóa của ergosterol peroxide) sự tăng sinh của các dòng tế bào khối u K562, Jurkat, WM-1341, HL-60 và RPMI-8226 hiệu quả hơn ( Kodama, Mc Caffrey, Yusa, và Mitsuya (2000) ). Hơn nữa, các phân đoạn chloroform và n-butanol của chiết xuất metanol từ CS đã được nghiên cứu cho trong ống nghiệm hoạt động ức chế tăng trưởng tế bào khối u. Các chất chiết xuất được thử nghiệm cho thấy sự ức chế phụ thuộc vào liều lượng đối với việc tăng cường sản xuất TNF-α và IL-12 trong các đại thực bào phúc mạc ở chuột được kích hoạt LPS/IFN-γ. Mặt khác, các chất chiết xuất này cũng được đánh giá về hoạt tính tăng sinh tế bào khối u trong các loại tế bào ung thư khác nhau như Jurkat, HepG2, PC 3, Colon 205, và MCF 7 cũng như các PBMC bình thường và cho thấy sự ức chế tăng trưởng trên những chất chiết xuất này. các tế bào ung thư nhưng không có tác dụng gây độc tế bào đối với các PBMC bình thường trong phạm vi nồng độ được nghiên cứu (0–150 μg/ml) ( Rao, Fang, & Tzeng, 2007 ). Tác dụng ức chế của CS cũng được báo cáo bởi một số nhà nghiên cứu khác ( Chen et al., 1997 , Du, 1986 , Lâm, 1984 , Trương, 1987 ).
Bệnh tiểu đường là một vấn đề sức khỏe phổ biến nghiêm trọng, đặc biệt là trong cộng đồng dựa vào chế độ ăn uống phương Tây. Một lượng lớn nghiên cứu đã được tiến hành về tác dụng có lợi của CS đối với quá trình chuyển hóa đường huyết và tiềm năng của nó như một tác nhân điều chỉnh lượng đường trong máu.
Trong một trong cơ thể sống nghiên cứu dược lý, Cordy Max™ Cs-4, một sản phẩm lên men sợi nấm của CS, được sử dụng để kiểm tra hiệu quả cải thiện chuyển hóa glucose và độ nhạy insulin của nó. Các can thiệp nghiên cứu được xác định trong 17 ngày đối với chuột Wistar trưởng thành (đực và cái) và đo đường huyết lúc đói, insulin huyết tương lúc đói, chỉ số glucose-insulin và dung nạp glucose đường uống. Nó gây ra: (1) giảm đường huyết lúc đói, (2) giảm 37% insulin huyết tương lúc đói ở nhóm điều trị liều cao, (3) tăng chỉ số glucose-insulin, (4) cải thiện dung nạp glucose ở mức 0,5, 1,0, và 2 giờ sau khi uống một lượng lớn glucose ( Zhao et al., 2002 ).
Trong một nghiên cứu so sánh hoạt động chống tăng đường huyết của CS tự nhiên và CS lên men, chuột Wistar đực bị gây ra bệnh tiểu đường bởi nicotinamide và streptozotocin. Những con chuột này được cho uống giả dược (nhóm STZ), thể quả (nhóm FB, 1 g/ngày), hệ sợi nấm lên men (nhóm MCS, 1 g/ngày), canh thang lên men (nhóm BCS, 1 g/ngày) hoặc lên men sợi nấm cộng với nước dùng (nhóm XCS, 0,5 g/ngày mỗi loại) của CS. Nồng độ glucose trong máu và nồng độ fructosamine trong huyết thanh thấp hơn đáng kể ở nhóm FB, MCS, BCS và XCS so với nhóm STZ. Điều này chỉ ra rằng, các sản phẩm lên men của CS có thể được phát triển thành các chất chống đái tháo đường tiềm năng hoặc thực phẩm chức năng cho những người có nguy cơ mắc bệnh đái tháo đường cao ( Lo, Hsu, Tu, & Lin, 2006 ). Nghiên cứu lâm sàng tương tự trên những bệnh nhân mắc bệnh tăng đường huyết khi được điều trị hàng ngày bằng CS (3 g cho thấy sự cải thiện về lượng đường trong máu của họ là 95% trong khi những người được điều trị y tế chính thống chỉ cải thiện được 54% ( http://www.advancedalternativescenter.com/Marvlix_with_Cordyceps_Sinensis_p /marvlix.ht ). đông trùng hạ thảo cải thiện chuyển hóa đường huyết và tăng độ nhạy insulin ở động vật bình thường ( Zhao et al., 2002 ).
Quá trình chống viêm được coi là nguy cơ hoặc yếu tố khởi phát đột quỵ ở người. Nhiều tác nhân dược lý hiệu quả được sử dụng để điều trị các bệnh viêm nhiễm và các mục tiêu dược lý mới tiếp tục được khám phá, đây là một lĩnh vực quan trọng đối với y học tịnh tiến. Gần đây CS được phát hiện là có hiệu quả chống lại các phản ứng viêm.
Trong một nghiên cứu, các chất chiết xuất từ dầu thô và các phân đoạn tinh khiết một phần của sợi nấm CS đã được thử nghiệm về tác dụng ức chế của chúng đối với việc tạo ra anion superoxide và giải phóng elastase bởi bạch cầu trung tính của con người để đáp ứng với N -formyl-methionyl-leucyl phenylalanine/cytochalasin B (FMLP/CB). Lần đầu tiên, năm thành phần của Cordysinin A–E (1–5) đã được xác định và cho thấy có sự ức chế đáng kể ( Yang, Kuo, Hwang, & Wu, 2011 ). Cordymin, một peptide tinh khiết từ loại nấm này được phát hiện có tác dụng chống lại các cytokine (IL-1β và TNF-α) để giảm mức độ nghiêm trọng của phản ứng viêm. Cordymin-2 và cordymin-4 cho thấy hiệu quả ức chế lần lượt là 53 và 73% ( Qian et al., 2012 ). Liu, Li, Zhao, Tang và Guo (2011) đã chứng minh khả năng bảo vệ thần kinh của việc ức chế sợi nấm CS thông qua việc chống viêm trong mô hình chuột tái tưới máu do thiếu máu cục bộ ( Liu và cộng sự, 2011 ). Các phân đoạn chloroform và n-butanol của chiết xuất metanol từ CS đã được nghiên cứu về hoạt tính chống viêm của chúng. Các chiết xuất được thử nghiệm cho thấy sự ức chế phụ thuộc vào liều lượng trong việc tăng cường sản xuất các chất trung gian gây viêm như oxit nitric (NO) thông qua việc giảm biểu hiện NO synthase cảm ứng ( Rao et al., 2007 ).
Trong một thời gian dài điều trị viêm thận, CS đã được chứng minh là có đóng góp lớn và đã được sử dụng liên tục. MỘT trong ống nghiệm mô hình nhằm giải quyết vấn đề sinh bệnh học của immunoglobulin a nephropathy (IgAN) do tác động có hại của các cytokine và các yếu tố tăng trưởng được giải phóng bởi các tế bào trung mô khi được kích thích bởi phức hợp miễn dịch IgA nephritogen (IgAIC). Do đó, chế độ kích hoạt tế bào trung mô của con người (HMC) đã được thiết lập và ủ với IL-1 và IL-6. Dịch chiết MeOH thô thu được từ thể quả của CS, tiếp tục được phân đoạn bằng sắc ký cột silica gel để có 6 phần. Fraction (F-2), một trong số chúng được phát hiện là có hiệu quả chống lại IL-1 và IL-6. Hơn nữa trong mô hình động vật IgAN nơi tiểu máu và protein niệu được gây ra bởi R36A (Pneumococcal C-polysacarit được tinh chế từ Streptococcus pneumoniae ) dưới dạng kháng nguyên và kháng thể đơn dòng IgA kháng R36A. Những con chuột trong mô hình IgAN được cho ăn 1% F-2 trong chế độ ăn đã giảm đáng kể tiểu máu và protein niệu cùng với sự cải thiện mô bệnh học. H1-A, một hợp chất tinh khiết có thể ức chế HMC đã hoạt hóa và làm giảm bớt IgAN (bệnh Berger) với sự cải thiện về mặt lâm sàng và mô học ( Ding et al., 2011 ).
Do tác dụng phụ nghiêm trọng, liều cao cyclosporin A (CsA) không thể được sử dụng trong điều trị lâu dài cho người nhận ghép thận. Khi bệnh nhân ghép thận được điều trị bằng CS, nó gây ra: (1) ít biến chứng nhất trong nhóm điều trị, (2) không có sự khác biệt đáng kể về nồng độ IL-2 trong huyết thanh ở hai nhóm và nồng độ IL-10 trong huyết thanh trong điều trị nhóm. Nghiên cứu đề xuất rằng CS có thể được sử dụng kết hợp với CsA liều thấp trong điều trị lâu dài cho bệnh nhân ghép thận ( Ding et al., 2009 , Ding et al., 2011 ) và cả trong các thí nghiệm cấp tính và mãn tính tương tự CS cho thấy bảo vệ thận khỏi cyclosporine A nephrotoxicity (CsA-Nx) và cải thiện tổn thương cầu thận và mô kẽ ( Zhao & Li, 1993 ). Trong một nghiên cứu khác, tác dụng của CS đối với độc tính trên thận do aminoglycoside (AG) gây ra đã được đánh giá. Những con chuột bị tổn thương ống thận cho thấy sự cải thiện khả năng chữa lành sau khi điều trị, được chứng minh bằng sự gia tăng ít nổi bật hơn của BUN, SCr, bài tiết natri, NAGase trong nước tiểu và mức độ thay đổi mô bệnh học ít nghiêm trọng hơn so với đối chứng ( Li, Zheng, & Liu, 1996 ). Trong một nghiên cứu tương tự, tác dụng bảo vệ đối với độc tính trên thận của aminoglycoside do CS ở những bệnh nhân lớn tuổi cũng được quan sát thấy ( Bao et al., 1994 , Zhu và Rippe, 2004 ).
Tác dụng chữa bệnh của CS đối với bệnh thận mãn tính đã được chứng minh ( Zhong et al., 2011 ). CS đã được thử nghiệm trên chuột bị cắt bỏ thận 5/6 và vào tuần thứ 4 và 8 sau khi cắt bỏ thận 5/6, những con chuột đã bị hy sinh thận, lấy huyết thanh và nước tiểu để lấy Phân tích quang phổ 1 H NMR. Tác dụng chữa bệnh của CS cũng được xác nhận bằng kết quả siêu hình học.
Nhiều thử nghiệm trên người đã được tiến hành để kiểm tra hiệu quả của CS trong việc ngăn ngừa tổn thương phổi và thận. Châu và cộng sự. (2008) nghiên cứu về khả năng tăng cường sức khỏe thận của CS ( http://www.advancedalternativescenter.com/Marvlix_with_Cordyceps_Sinensis_p/marvlix.ht ). Họ phát hiện ra rằng hiệu ứng này có thể đến từ việc tăng sản xuất đáng kể nồng độ 17-hydroxy-corticosteroid và 17-ketosteriod ( Hobbs, 1995 ). Quan et al. (1992) đã tiến hành một thử nghiệm trên 51 bệnh nhân bị suy thận mãn tính, đây là tình trạng đe dọa tính mạng thường ảnh hưởng đến người cao tuổi. Khi những bệnh nhân này được dùng thuốc (CS ở mức 3–5 g/ngày), nó cho thấy sự cải thiện đáng kể về chức năng thận ( Guan et al., 1992 ). Đôi khi suy thận thường liên quan đến các vấn đề xảy ra ở các cơ quan và hệ thống khác như tăng huyết áp, protein niệu và thiếu máu. Một nghiên cứu liên quan đến các đối tượng mắc các bệnh nói trên, được điều trị bằng CS. CS giảm huyết áp (15%) sau một tháng, giảm đáng kể protein niệu và tăng men superoxide dismutase. Nghiên cứu tiếp tục cho thấy rằng sự gia tăng khả năng nhặt gốc tự do của oxy trong máu, điều này sẽ dẫn đến giảm tổn thương tế bào do oxy hóa. Hơn nữa, 57 bệnh nhân bị tổn thương thận do gentamicin được điều trị bằng 4,5 g đông trùng hạ thảo mỗi ngày. CS cải thiện chức năng thận bình thường (89%) so với nhóm đối chứng (45%) sau sáu ngày, cho thấy CS rút ngắn thời gian hồi phục một cách hiệu quả ( Zhu & Rippe, 2004 ).
Hong, Zhang và Fan (2012) , trong một trong những giao thức can thiệp của họ để xem xét, đã thảo luận về việc sử dụng CS phổ biến như một chất ức chế miễn dịch bổ trợ trong cả điều trị duy trì dài hạn ban đầu cho những người nhận ghép thận ở Trung Quốc ( Hong và cộng sự, 2012 ) và một số nghiên cứu khác đã được thực hiện để cung cấp thông tin cần thiết về CS, chìa khóa cho sức khỏe của thận ( Xu, Huang, Jiang, Xu, & Mi, 1995 ).
Nhiều bệnh về đường hô hấp như hen suyễn, COPD và viêm phế quản đã được điều trị bằng CS, vốn đã được sử dụng như một biện pháp thúc đẩy sức khỏe đường hô hấp ở Trung Quốc trong hơn một nghìn năm. Gần đây, các thử nghiệm lâm sàng trên người đã được thực hiện để chứng minh Đông trùng hạ thảo có khả năng tăng cường sử dụng oxy và hấp thu oxy của tế bào. Chuột được điều trị bằng CS để tìm kiếm tình trạng sống sót của chúng trong môi trường oxy thấp. Những con chuột sống sót lâu hơn ba lần so với những con chuột không được điều trị chấp nhận thực tế khoa học rằng CS có khả năng sử dụng oxy hiệu quả ( Zhu & Rippe, 2004 ) và cải thiện chức năng hô hấp ( Han, 1995 , Zheng và Deng, 1995 ).
Wang, Leeb, Chenc, Yud và Duh (2012) điều tra các hành động bảo vệ gan của chiết xuất nước của cả CS và đông trùng hạ thảo và so sánh giữa chúng. đông trùng hạ thảo dịch chiết (CME) và dịch chiết CS (CSE) ở mức 500 μg/ml được xử lý bằng t -butyl hydroperoxide (t-BHP) gây ra tế bào HepG2. Các chất chiết xuất cho thấy không có sự khác biệt đáng kể trong hoạt động của chúng đối với việc tạo ra các loại oxy phản ứng (ROS), hàm lượng chất hài hòa kích thích glutathione (GSH), sự hình thành TBARS và tỷ lệ Bcl-2/Bax. Nhưng CME cho thấy tác dụng ức chế tốt hơn đối với hoạt động caspase 3 và CSE thể hiện hoạt tính vượt trội đối với tiềm năng màng ty thể ( Wang et al., 2012 ).
Apoptosis là một cái chết tế bào được lập trình gây ra thông qua các yếu tố bên ngoài thông qua kích hoạt con đường Caspase 8 hoặc các yếu tố bên trong thông qua con đường ty thể. Caspase có vai trò to lớn trong con đường truyền tín hiệu apoptotic và đóng góp vào hình thái apoptotic tổng thể bằng cách gây ra những thiệt hại không thể đảo ngược đối với các thành phần tế bào.
Sterol trong chiết xuất metanol và ethyl axetat của sợi nấm nuôi cấy CS được báo cáo là có tác dụng gây chết theo chương trình mạnh đối với các tế bào HL-60 bệnh bạch cầu tiền tủy bào, gây ra sự phân mảnh DNA vốn là đặc điểm của các tế bào theo chương trình ( Matsuda et al., 2009 ). Công trình tương tự chứng minh, cordycepin trong chiết xuất CS gây ra quá trình chết theo chương trình của tế bào khối u Leydig chuột MA-10 thông qua việc kích hoạt con đường caspase-9 và -3 và -7. Phương pháp điều trị bằng cordycepin dẫn đến làm tròn tế bào, chảy máu màng sinh chất và phân mảnh DNA bằng cách bắt giữ các giai đoạn tổng hợp trước nguyên phân. Nghiên cứu cho thấy cơ chế tác dụng chống ung thư qua trung gian apoptotic của cordycepin ( Jen, Lin, Huang, & Leu, 2011 ) Hình 4 . Nghiên cứu tương tự đã báo cáo quá trình chết theo chương trình của các tế bào HL-60 bằng chiết xuất sợi nấm CS ( Zhang và Wu, 2007 , Zhang et al., 2004 ) và các đặc tính chống apoptotic của CS ( Buenz, Weaver, Bauer, Chalpin, & Badley, 2004 ).
Hoạt động kích thích tình dục gần đây đã được báo cáo do nghi ngờ testosterone giống như chất chuyển hóa và hoạt động thúc đẩy ham muốn tình dục trong CS. Vương và cộng sự. báo cáo rằng CS có chứa một yếu tố kích thích sản xuất corticosteroid trong mô hình động vật. Trong nghiên cứu này, một chiết xuất hòa tan trong nước của CS đã được sử dụng để nghiên cứu chức năng dược lý của nó đối với việc nuôi cấy tế bào tuyến thượng thận sơ cấp của chuột và con đường truyền tín hiệu liên quan. Nhưng các tác giả không chắc chắn về cơ chế của CS gây ra steriodogenesis, cho dù nó tác động trực tiếp lên tuyến thượng thận hay gián tiếp thông qua trục dưới đồi-tuyến yên ( Wang, Lee, Lin, & Chang, 1998 ). Một nghiên cứu báo cáo rằng chiết xuất nước nóng có tác dụng có lợi nhẹ đối với chức năng tình dục ở chuột bị thiến ( Ji et al., 2009 ).
Một nghiên cứu lâm sàng báo cáo rằng việc bổ sung CS cho 22 nam giới cho thấy số lượng tinh trùng tăng lên (33%) và giảm tỷ lệ dị tật tinh trùng (29%) ( Guo, 1986 ) . Trong một nghiên cứu khác liên quan đến cả nam và nữ trên 189 bệnh nhân bị giảm ham muốn và ham muốn cho thấy sự cải thiện các triệu chứng và ham muốn là 66% khi điều trị bằng CS ( Wan, Guo, & Deng, 1988 ). Hơn nữa, sau khi bổ sung CS giúp ngăn ngừa và cải thiện tuyến thượng thận và hormone tuyến ức, đồng thời số lượng tinh trùng vô sinh được cải thiện 300% ( Huang et al., 1987 ), cải thiện ham muốn tình dục và ham muốn ở mức 86% ở phụ nữ ( Dong & Yao, 2007 ) .
Nhiều nghiên cứu đã được thực hiện để chứng minh rằng CS làm giảm mệt mỏi và tăng sức chịu đựng cho các vận động viên. Phần nước nóng (CTNH) của sợi nấm CS chủ yếu chứa carbohydrate (78,9%) được cho chuột uống để xác định khả năng chịu đựng khi bơi bằng cách sử dụng bể bơi có dòng điện điều chỉnh được. CS được phát hiện kéo dài thời gian bơi (75–90 phút) của các nhóm thử nghiệm so với nhóm đối chứng cho thấy chiết xuất CTNH có tác dụng phục hồi sau khi kiệt sức và giảm mệt mỏi ( Koh et al., 2003 ). Và trong các nghiên cứu tương tự, những con chuột đã chứng minh khả năng bơi lội được cải thiện của chúng sau 6 tuần bổ sung CS so với nhóm đối chứng ( Xiao et al., 1999 ). Trong một trong cơ thể sống nghiên cứu dược lý, tác dụng của CordyMax Cs-4, một sản phẩm lên men sợi nấm của CS, đối với quá trình chuyển hóa năng lượng đã được đánh giá. Ở những con chuột được cho uống CS-4, họ nhận thấy mức độ tăng của β adenosine triphosphate (ATP) trong gan cho thấy tình trạng năng lượng sinh học ở gan cao hơn, cho thấy hiệu quả lâm sàng của CordyMax trong việc giảm mệt mỏi và cải thiện sức bền thể chất, đặc biệt là ở những người cao tuổi ( Dai, 2001 ).
Thành tích khó tin của các vận động viên nữ Trung Quốc tại Đại hội thể thao toàn quốc Trung Quốc ở Bắc Kinh vào tháng 9 năm 1993 đã làm kinh ngạc thế giới điền kinh quốc tế. Điều này đã thu hút sự chú ý của quốc tế đối với nấm sâu bướm ( Steinkraus, 1994 ).
C. sinensis là một loại nấm ăn dược liệu chắc chắn có thể được bổ sung trong thực phẩm thông thường, thực phẩm tốt cho sức khỏe, thực phẩm chức năng hoặc dưới dạng dược phẩm dinh dưỡng. Nhưng một nghiên cứu khoa học kỹ lưỡng về phân tích thành phần để đánh giá chất lượng dinh dưỡng và hoạt tính sinh học của CS là cần thiết. Có một nhu cầu cho trong cơ thể sống xác nhận để chứng minh tiềm năng sức khỏe của nó và để xác định, mô tả đặc điểm của các phân tử sinh học mới để liên kết hoạt động sinh học của chúng để gia tăng giá trị. Cần tuân thủ các phương pháp canh tác nhân tạo hiệu quả đối với CS để thu được sinh khối ướt hoặc khô để khai thác quy mô lớn các nguyên tắc hoạt tính sinh học. Một nghiên cứu kỹ lưỡng về các nguyên tắc khoa học đã được thiết lập là cần thiết để xử lý CS ở hạ lưu hiệu quả theo cách tiết kiệm chi phí và để sản xuất bền vững bằng cách sử dụng trong ống nghiệm công nghệ. Vai trò có thể được nâng cao của CS như vậy hoặc các chất chiết xuất của nó trong ngành công nghiệp thực phẩm và dược phẩm để phát triển sức khỏe, thực phẩm chức năng và dược phẩm dinh dưỡng với bằng chứng khoa học không thể nghi ngờ là nhu cầu cấp bách. Hơn nữa, các nghiên cứu về đóng gói chiết xuất CS để tạo thành các dạng có thể phân phối được như liposome và nhũ tương thực phẩm để thiết kế các hệ thống phân phối thuốc bền vững.
C. sinensis là một trong những loại thuốc truyền thống kỳ diệu của Trung Quốc đang ngày càng phổ biến vì những lợi ích sức khỏe phi thường của nó như tăng cường sức chịu đựng thể chất để có hiệu suất vượt trội, chống ung thư và bảo vệ phổi và thận. Loại nấm này do đặc tính chữa bệnh vượt trội của nó nên có nhu cầu rất lớn về sản phẩm chăm sóc sức khỏe và mang lại lợi nhuận tài chính khổng lồ cho những người thu gom. Sự phổ biến và nhu cầu của nó đã khẳng định thêm tầm quan trọng to lớn của hệ thống thuốc Đông y.
Các cơ chế hoạt động của các hợp chất hoạt tính sinh học của CS vẫn chưa được nghiên cứu khoa học và còn quá nhiều vấn đề khác về con đường sinh hóa cần được làm sáng tỏ. Có một nhu cầu cấp thiết để đưa ra các phương pháp canh tác hiệu quả và đảm bảo các công nghệ xử lý hiệu quả để thu hồi tối đa các nguyên tắc hoạt tính sinh học. Hơn nữa, chiết xuất thô của CS cần phải được đặc trưng hóa học tốt hơn là ngoại suy trong ống nghiệm thông tin chỉ để ngụ ý tầm quan trọng điều trị. Hơn nữa, phân đoạn được hướng dẫn sinh học và liên kết các thành phần hoạt động với các hoạt động sinh học khác nhau trong CS cung cấp nhiều phạm vi nghiên cứu. Mặc dù nó cho thấy các tác dụng dược lý mạnh nhưng cơ chế đằng sau những tác động này ở mức độ tương tác ở cấp độ phân tử trong hệ thống của con người vẫn chưa rõ ràng và đây phải là một nghiên cứu khoa học kỹ lưỡng để trả lời mọi khía cạnh của CS.
Tác giả (SMG) công nhận giải thưởng học bổng nghiên cứu cao cấp từ Hội đồng Nghiên cứu Khoa học và Công nghiệp, New Delhi, Ấn Độ. Các tác giả cũng cảm ơn Giám đốc, CSIR-Viện Nghiên cứu Công nghệ Thực phẩm Trung tâm, Mysore, Ấn Độ vì sự khích lệ đã được đưa ra.